Abstract
In this Ph.D.-thesis, phenotypic complementation of AT-cells (AT5BIVA) by transfection of cDNA-expression-libraries was adressed: After stable transfection of cDNA-expression-libraries G418 resistant clones were selected for enhanced radioresistance by a fractionated X-ray selection. One surviving transfectant clone (clone 514) exhibited enhanced radiation resistance in dose-response experiments and further X-ray selections. Cell cycle analysis revealed complementation of untreated and irradiated 514-cells in cell cycle progression. The rate of DNA synthesis, however, is not diminished after irradiation but shows the reverse effect. A transfected cDNA-fragment (AT500-cDNA) was isolated from the genomic DNA of 514-cells and proved to be an unknown DNA sequence. A homologous sequence could be detected in genomic DNA from human cell lines, but not in DNA from other species. The cDNA-sequence could be localized to human chromosome 11. In human cells the cDNA sequence is part of two large mRNAs. 4 different cosmid clones containing high molecular genomic DNA from normal human cells could be isolated from a library, each hybridizing to the AT500-cDNA. After stable transfection into AT-cells, one cosmid-clone was able to confer enhanced radiation resistance both in X-ray selections and dose-response experiments. The results indicate that the cloned cDNA-fragment is based on an unknown gene from human
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Fritz, E.
Complementation of radiation-sensitive Ataxia telangiectasia cells after transfection of cDNA expression libraries and cosmid clones from wildtype cells; Komplementation strahlensensitiver Ataxia telangiectasia-Zellen durch Transfektion von cDNA-Bibliotheken und Cosmidklonen aus Wildtyp-Zellen.
Germany: N. p.,
1994.
Web.
Fritz, E.
Complementation of radiation-sensitive Ataxia telangiectasia cells after transfection of cDNA expression libraries and cosmid clones from wildtype cells; Komplementation strahlensensitiver Ataxia telangiectasia-Zellen durch Transfektion von cDNA-Bibliotheken und Cosmidklonen aus Wildtyp-Zellen.
Germany.
Fritz, E.
1994.
"Complementation of radiation-sensitive Ataxia telangiectasia cells after transfection of cDNA expression libraries and cosmid clones from wildtype cells; Komplementation strahlensensitiver Ataxia telangiectasia-Zellen durch Transfektion von cDNA-Bibliotheken und Cosmidklonen aus Wildtyp-Zellen."
Germany.
@misc{etde_10121510,
title = {Complementation of radiation-sensitive Ataxia telangiectasia cells after transfection of cDNA expression libraries and cosmid clones from wildtype cells; Komplementation strahlensensitiver Ataxia telangiectasia-Zellen durch Transfektion von cDNA-Bibliotheken und Cosmidklonen aus Wildtyp-Zellen}
author = {Fritz, E}
abstractNote = {In this Ph.D.-thesis, phenotypic complementation of AT-cells (AT5BIVA) by transfection of cDNA-expression-libraries was adressed: After stable transfection of cDNA-expression-libraries G418 resistant clones were selected for enhanced radioresistance by a fractionated X-ray selection. One surviving transfectant clone (clone 514) exhibited enhanced radiation resistance in dose-response experiments and further X-ray selections. Cell cycle analysis revealed complementation of untreated and irradiated 514-cells in cell cycle progression. The rate of DNA synthesis, however, is not diminished after irradiation but shows the reverse effect. A transfected cDNA-fragment (AT500-cDNA) was isolated from the genomic DNA of 514-cells and proved to be an unknown DNA sequence. A homologous sequence could be detected in genomic DNA from human cell lines, but not in DNA from other species. The cDNA-sequence could be localized to human chromosome 11. In human cells the cDNA sequence is part of two large mRNAs. 4 different cosmid clones containing high molecular genomic DNA from normal human cells could be isolated from a library, each hybridizing to the AT500-cDNA. After stable transfection into AT-cells, one cosmid-clone was able to confer enhanced radiation resistance both in X-ray selections and dose-response experiments. The results indicate that the cloned cDNA-fragment is based on an unknown gene from human chromosome 11 which partially complements the radiosensitivity and the defective cell cycle progression in AT5BIVA cells. (orig.) [Deutsch] Es wurde die phaenotypische Komplementation von AT-Zellen (AT5BIVA, Komplementationsgruppe D) durch stabile Transfektion von cDNA-Bibliotheken angestrebt: Nach Transfektion von cDNA-Bibliotheken wurden die G418-resistenten Zellklone in einer sequentiellen, mehrtaegigen Bestrahlung mit je 0,6 Gy Roentgenstrahlen selektioniert. Einer der ueberlebenden Transfektantenklone (Klon 514) erwies sich als stabil strahlenresistenter im Vergleich zu AT-Zellen. Die Analyse der Zellzyklus-Phasen verdeutlicht, dass sowohl unbestrahlte als auch bestrahlte 514-Zellen in diesem Merkmal komplementiert sind. Die DNA-Synthese ist jedoch nach Bestrahlung nicht staerker hemmbar als in AT-Zellen, sondern zeigt den umgekehrten Effekt. Aus der genomischen DNA der 514-Zellen konnte ein transfiziertes cDNA-Fragment (AT500-cDNA) isoliert werden, welches eine bisher unbekannte DNA-Sequenz darstellt. Eine zur AT500-cDNA homologe, endogene Sequenz ist in der DNA aller untersuchter menschlicher Zellen, nicht aber Zellen anderer Spezies vorhanden. Die cDNA-Sequenz konnte auf dem menschlichen Chromosom 11 lokalisiert werden. In menschlichen Zellen ist die AT500-cDNA als Bestandteil von zwei mRNAs nachweisbar. Aus einer Cosmidbibliothek wurden 4 verschiedene Cosmidklone isoliert, die mit AT500 hybridisieren. Diese zur AT500-Sequenz homologen Cosmidklone wurden stabil in AT-Zellen transfiziert und die G418-resistenten Zellen auf ihre Strahlenresistenz getestet. Einer der Cosmidklone vermittelt erneut partielle Strahlenresistenz. Die Ergebnisse verdeutlichen, dass dem klonierten cDNA-Fragment ein bisher unbekanntes Gen zugrunde liegt, welches in den verwendeten AT-Zellen die Strahlensensitivitaet sowie die krankhaft veraenderte Regulation der Zellzyklusphasen nach Bestrahlung partiell komplementiert und auf dem menschlichen Chromosom 11 lokalisert ist. (orig./MG)}
place = {Germany}
year = {1994}
month = {Jun}
}
title = {Complementation of radiation-sensitive Ataxia telangiectasia cells after transfection of cDNA expression libraries and cosmid clones from wildtype cells; Komplementation strahlensensitiver Ataxia telangiectasia-Zellen durch Transfektion von cDNA-Bibliotheken und Cosmidklonen aus Wildtyp-Zellen}
author = {Fritz, E}
abstractNote = {In this Ph.D.-thesis, phenotypic complementation of AT-cells (AT5BIVA) by transfection of cDNA-expression-libraries was adressed: After stable transfection of cDNA-expression-libraries G418 resistant clones were selected for enhanced radioresistance by a fractionated X-ray selection. One surviving transfectant clone (clone 514) exhibited enhanced radiation resistance in dose-response experiments and further X-ray selections. Cell cycle analysis revealed complementation of untreated and irradiated 514-cells in cell cycle progression. The rate of DNA synthesis, however, is not diminished after irradiation but shows the reverse effect. A transfected cDNA-fragment (AT500-cDNA) was isolated from the genomic DNA of 514-cells and proved to be an unknown DNA sequence. A homologous sequence could be detected in genomic DNA from human cell lines, but not in DNA from other species. The cDNA-sequence could be localized to human chromosome 11. In human cells the cDNA sequence is part of two large mRNAs. 4 different cosmid clones containing high molecular genomic DNA from normal human cells could be isolated from a library, each hybridizing to the AT500-cDNA. After stable transfection into AT-cells, one cosmid-clone was able to confer enhanced radiation resistance both in X-ray selections and dose-response experiments. The results indicate that the cloned cDNA-fragment is based on an unknown gene from human chromosome 11 which partially complements the radiosensitivity and the defective cell cycle progression in AT5BIVA cells. (orig.) [Deutsch] Es wurde die phaenotypische Komplementation von AT-Zellen (AT5BIVA, Komplementationsgruppe D) durch stabile Transfektion von cDNA-Bibliotheken angestrebt: Nach Transfektion von cDNA-Bibliotheken wurden die G418-resistenten Zellklone in einer sequentiellen, mehrtaegigen Bestrahlung mit je 0,6 Gy Roentgenstrahlen selektioniert. Einer der ueberlebenden Transfektantenklone (Klon 514) erwies sich als stabil strahlenresistenter im Vergleich zu AT-Zellen. Die Analyse der Zellzyklus-Phasen verdeutlicht, dass sowohl unbestrahlte als auch bestrahlte 514-Zellen in diesem Merkmal komplementiert sind. Die DNA-Synthese ist jedoch nach Bestrahlung nicht staerker hemmbar als in AT-Zellen, sondern zeigt den umgekehrten Effekt. Aus der genomischen DNA der 514-Zellen konnte ein transfiziertes cDNA-Fragment (AT500-cDNA) isoliert werden, welches eine bisher unbekannte DNA-Sequenz darstellt. Eine zur AT500-cDNA homologe, endogene Sequenz ist in der DNA aller untersuchter menschlicher Zellen, nicht aber Zellen anderer Spezies vorhanden. Die cDNA-Sequenz konnte auf dem menschlichen Chromosom 11 lokalisiert werden. In menschlichen Zellen ist die AT500-cDNA als Bestandteil von zwei mRNAs nachweisbar. Aus einer Cosmidbibliothek wurden 4 verschiedene Cosmidklone isoliert, die mit AT500 hybridisieren. Diese zur AT500-Sequenz homologen Cosmidklone wurden stabil in AT-Zellen transfiziert und die G418-resistenten Zellen auf ihre Strahlenresistenz getestet. Einer der Cosmidklone vermittelt erneut partielle Strahlenresistenz. Die Ergebnisse verdeutlichen, dass dem klonierten cDNA-Fragment ein bisher unbekanntes Gen zugrunde liegt, welches in den verwendeten AT-Zellen die Strahlensensitivitaet sowie die krankhaft veraenderte Regulation der Zellzyklusphasen nach Bestrahlung partiell komplementiert und auf dem menschlichen Chromosom 11 lokalisert ist. (orig./MG)}
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