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lectroporation But : Rendre des bactries ultra-comptentes pour des transformations.
 

Summary: Électroporation
But : Rendre des bactéries ultra-compétentes pour des transformations.
Remarque importante :
À partir de l'étape 3, toutes les étapes se font sur la glace dans la chambre
froide à 4 °C!!! De plus, tout le matériel dont vous aurez besoin doit être
placé dans la chambre froide au moins 2h avant le début de l'expérience
pour que le tout est le temps de refroidir.
Méthode (Protocole Bio-Rad) :
1. Faire pousser O/N 5 ml de bactéries à 37 °C avec agitation.
2. Inoculer 500 ml de milieu avec les 5 ml de culture de la veille et les faire
pousser en agitation à 37 °C jusqu'à une DO600 nm située entre 0.45 et 0.6.
A partir de maintenant, toutes les étapes se font sur la glace.
3. Lorsque la DO est correcte, transférer la culture dans un godet de 500 ml et
laisser sur glace 20 min.
4. Centrifuger à 4000 g 15 min à 4 °C.
5. Enlever le surnageant au complet (il vaut mieux perdre des cellules que de
laisser du surnageant)
6. Resuspendre doucement le culot dans 40 ml glycérol 10% froid et transférer
dans un tube de 40 ml.
7. Centrifuger 10 min, à 4000 g à 4 °C puis enlever le surnageant.

  

Source: Abou Elela, Sherif - Département de Microbiologie et d'Infectiologie, Université de Sherbrooke

 

Collections: Biology and Medicine