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Summary: 1
Vérification de la taille de l'ADN plasmidique extrait par
digestion enzymatique
But : Lors d'une migration sur gel de 1 µl d'ADN non digéré et purifié, on
observe des bandes de différentes tailles, dûes à différents enroulements des
plasmides sur eux-mêmes. Ceux-ci migreront donc à une vitesse différente
dépendamment de leur forme.
Il n'est donc pas possible de voir si la taille du plasmide extrait est correct de
cette manière.
Il est alors nécessaire de digérer les plasmides avec un enzyme à site de
restriction unique pour vérifier que le plasmide est bien de la bonne taille, de
cette façon, on obtiendra une seule bande nette.
Digestion plasmidique :
Matériel :
- quantité d'ADN à digérer
- enzyme de restriction
- enzyme buffer
Méthode :
Pour une mini-prep, il faut 2-3 Unités d'enzyme/ tube.
Pour une maxi-prep, il faut 2-3 Unités d'enzyme/ µg d'ADN.
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